越来越多的免疫疗法在肿瘤和自身免疫性疾病治疗中进行使用，除了临床影像学，ORR，PFS等指标外，免疫细胞表型变化是直接的有效性评价方法。
最近Clinical cancer Research发表了一项临床二期研究结果（临床注册号：NCT01896869）：胰腺肿瘤疫苗联合伊匹单抗，用于转移性胰腺癌的维持治疗。
肿瘤疫苗和免疫检查点抑制剂（伊匹单抗）都是经典的免疫治疗方法，该研究使用质谱流式评价二者联用的免疫细胞表型变化。
检测方法

质谱流式，可实现单细胞水平，单次数十个蛋白质生物标志物分析，被广泛用于免疫异质性，肿瘤异质性等研究。
在本研究中，科学家们用质谱流式，分析20个病人的外周血淋巴细胞，对每个细胞进行数十个反应免疫细胞功能标志物检测，以鉴定免疫细胞类型，亚型，及功能表型，并计算其所占百分比。
评价肿瘤疫苗和伊匹单抗联合使用后，对免疫细胞亚群，功能表型的影响，从而评价免疫治疗效果及机制。
本研究检测标志物信息如下：CD2：表达于T细胞和NK细胞表面CD3，CD4，CD8:为T细胞及其亚型标志物CD7：T细胞共同标志物，在T细胞发育早期即出现，也存在于急性淋巴细胞白血病CD19：B细胞标志物，参与B细胞发育，增殖，分化CD25：IL-2Rα，CD4，CD25，FoxP3为Treg标志物CD45：表达于所有白细胞，又称为白细胞共同抗原CD45RA：表达于初始T细胞CD45RO：表达于记忆T细胞
CD127：IL-7Rα链OX40：表达于活化T细胞表面，共刺激因子之一
4-1BB：表达于活化T细胞表面，共刺激因子之一
免疫检查点：LAG3，CTLA-4，PD1，TIM3
趋化因子受体：CCR5，CCR6，CCR7，CXCR3细胞因子：IL-2，IFN-γ，TNF-αGZMB（颗粒酶B）：活化T细胞，NK细胞释放的效应分子
Ki67：细胞增殖标志物

结果

细胞标志物表达及细胞亚型


进展期及稳定期细胞亚型比例

20个病人细胞亚型分析


治疗后免疫标志物变化


治疗后初始T辅助细胞（naive T helper cells ，Th N)和初始细胞毒性T细胞（naïve cytotoxic T cells，Tc N)减少。记忆T辅助细胞（T helper effector memory cells ，Th EM)和记忆细胞毒性T细胞（effector memory cytotoxic T cells ，Tc EM)增加。其他T细胞亚型和B细胞未发生明显改变。细胞增殖生物标志物Ki67有非常明显增加。
免疫检查点PD1和TIM3有轻度增加。这与很多免疫检查点抑制剂治疗类似，使用一种免疫检查点抑制剂治疗时，其他免疫检查点表达增加，是耐药的一种机制。

结语
虽然本次临床研究未能明显改进总体生存OS，但是质谱流式结果显示，明显增加了抗肿瘤免疫细胞亚群，同时为进一步尝试使用其他联合用药方案提供了技术支撑。
主要参考文献
Annie A Wu et al，A Phase II Study of Allogeneic GM-CSF-Transfected Pancreatic Tumor Vaccine (GVAX) with Ipilimumab as Maintenance Treatment for Metastatic Pancreatic Cancer，Clin Cancer Res. 2020 Jun 26Laura Keller et al，Unravelling tumour heterogeneity by single-cell profiling of circulating tumour cells，Nat Rev Cancer . 2019 Oct;19(10):553-567